第二章微生物培养习题李丽静

选修一第二章微生物的培养与应用知识点及习题通榆一中生物组：李丽静一．知识点填空1.培养基的分类，从物理形态上可分为、，两者的主要区别是前者加入了，加入该物质的作用是。从化学成分上分为、。从功能上分为、2.培养基一般都含有的四类营养物质是、、、在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对、、的要求。例如在培养酵母菌使应将培养基的PH值调至。在培养乳酸菌的时候则需要提供（填有氧、无氧）的条件3．消毒和灭菌的主要区别是4.消毒的方法有（举3例）5.灭菌的方法有、、接种环用灭菌，玻璃器皿用灭菌，培养基用灭菌6.制备固体培养基的过程、、、、第3步时，不断用玻璃棒搅拌，目的是第5步结束后，将平板倒置的原因是7．微生物的接种方法很多，最常用的是、划线时需要用到的工具是，第一次灼烧的目的是，以后每次用到都要灼烧的目的是。划线结束时不能首位相连的原因是。8.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入相同的条件下培养，后一个培养基的作用是9.菌种的保存，一个是临时保存，先接种在培养基上带长出菌落后，放入度的冰箱内，但这种方法保存时间不长，菌种容易，另一个是长期保存，可以采用的方法，操作后放在度的冰箱中保存10.尿素（能、不能）直接被农作物吸收，所以要被土壤中细菌分解，土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成尿素被分解的反应式11.实验室中微生物的筛选的原理是：即人为提供有利于生长的条件（包括、、），同时其他微生物生长。12.在统计菌落数目是，采用（平板划线、稀释涂布平板法）来培养细菌。当样品的时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个，通常情况下活菌数和菌落数相等，但菌落数往往比活菌的试剂数目低，原因是，为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。前面所说测定微生物数量的方法叫，除此之外，另一种方法要借助，这种方法的缺点是13.进行实验时，设置对照的主要目的是：14.分离不同微生物要蚕蛹不同稀释度不同的原因是15.同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的、、等方面。16.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，培养某种细菌后，如果PH值，指示剂，这样，我们就可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。17.纤维素的组成元素，基本单位是，纤维素酶是一种酶，包括三种组分、、。前两种酶使纤维素分解成，第三种酶分解后的最终产物是18.刚果红是一种染料，它可以和像形成复合物，但不和水解后的纤维二塘和葡萄糖发生这种反应。这样，我们就可以通过是否产生来筛选纤维素分解菌。19.选择培养的目的是选择培养时用的是（液体、固体），在选择培养时，培养基添加的碳源是，鉴别培养基为（液体、固体）20.常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在时就加入刚果红。二、非选择题1.某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取lg，置于经过 法灭菌处理的(填液体、固体)培养基中，28℃振荡培养。（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行处理。之后，将菌液涂布接种于以为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。该培养基从功能来看属于培养基。为避免污染，需将培养皿呈状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计作为空白对照。（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是，则说明此种菌能够。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。2.生物技术实践相关习题（1）不同微生物对PH的要求不同，细菌常生活在性的环境中（2）在菊花组织培养中，对外植体常用和氯化汞进行消毒，在微生物培养中，对培养基常用方法进行灭菌（3）应用平板划线法分离微生物时，从第二次划线操作开始，每次总是从开始划线，并划线数次。（4）利用玉米秸秆生产燃料酒精，需从土壤中分离将秸秆分解为葡萄糖的微生物，所需要的培养基按功能分属于培养基，培养基中的碳源为，发酵阶段需要的菌种为，在产生酒精时要控制的发酵条件是。3.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经过细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如右图所示。请分析回答问题：KH2P041．4gNa2HPO42．1gMgSO4·7H200．2g葡萄糖l0g尿素1g琼脂15g将上述物质溶解后，用自来水定溶到1000ml(1)此培养基能否用于植物组织培养?，理由是(2)培养基中加入尿素的目的是筛选，这种培养基属于培养基(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和实验需要振荡培养，原因是。(4)转为固体培养时，常采用的方法接种，获得单菌落后继续筛选。(5)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿②玻棒、试管、锥形瓶和吸管③实验操作者的双手，需要灭菌的是：(填序号)需要消毒的是：(填序号)（6）在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有。（多选）A．由于土样不同B．由于培养基污染C．由于操作失误D．没有设置对照（7）实验结束后，使用过的培养基应该进行处理后，才能倒掉4.根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜及其菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、尿细菌、纤维杆菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容：首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。（1）利用无氮培养基可筛选出。（2）用不含有机碳源的选择培养基可筛选出。（3）酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入。（4）用含较高浓度NaCl的培养基可选择出；或者根据菌落的颜色呈现色，将其挑取单独培养。（5）利用伊红和美蓝培养基培养混合菌，菌落呈色并带有金属光泽的是，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红和美蓝鉴别培养基来确定。（6）在无氧环境下培养混合菌，可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制的生长，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出。（7）利用碳源为纤维素的液体培养基可筛选。（8）若筛选尿细菌，则配制的培养基特点是5.乙醇等"绿色能源"的开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：（1）玉米秸秆预处理后，因该选用 酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。（2）从以下哪些微生物中可以提取上述酶？（多选）A.酿制果醋的醋酸菌B.生长在腐木上的霉菌C.制作酸奶的乳酸菌D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌E.反刍动物瘤胃中生存的某些微生物（3）若从土壤中分离生产这种酶的微生物，所需要的培养基为（按功能分），培养基中的碳源为。（4）从生物体提取出的酶首先要检测，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够反复利用，可采用技术。（5）发酵阶段需要的菌种是，生产酒精的反应方程式：6.（2011年高考题）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效率降低原油的菌株。回答问题（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_______和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。7.甘蔗含糖量高,是生产燃料酒精的优质材料。为了提高酒精产量，既需要选用优质甘蔗品种作原料，又需要选择具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌作为理想的酒精发酵菌种。根据所学，知识回答下面的问题。(1)如果要用甘蔗的外植体作为材料对甘蔗进行大规模种植，在对甘蔗外植体细胞进行接种前,需要进行和两项工作。(2)在外植体培养获得幼苗的过程中，除了需要提供一定的营养、、温度和光照外，还必须在无菌的条件下培养。(3)为了获得理想的酵母菌菌种，可以对野生菌种进行。然后在（固体、液体）选择培养基上进行培养,该培养基要比一般培养基额外添加_______，并且将PH_______(填“调高”或“调低”）。在该培养基中挑选生长的菌落,即为耐高糖、耐酸特性的突变酵母菌。(4)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，这些物质酵母菌是无法直接利用的,原因是其将蔗渣废弃物通过沼气池发酵后，将沼渣还田，农作物能从中获得所需的8.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答：（1)对买回来的菌种进行扩大培养。首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：、、、、，其中提供氮源的主要是；提供碳源的主要物质是；琼脂的作用是，他不提供营养。（2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的。在烧杯中加入琼脂后要不停地，防止。（3)将配制好的培养基分装包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌，压力是kPa，温度是。灭菌完毕后拔掉电源。待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基此试管应。（4)从一支试管向另一支试管接种时，接种环要在酒精灯(“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放人℃冰箱中保藏。 1.答案（1）高压蒸汽灭菌液体（2）系列稀释（或"梯度稀释"）淀粉（1分）倒置固体未接种的空白培养基（或接种等量无菌水的培养基）（3）出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解（平板）划线2.（1）中性或微碱性（2）70%的酒精高压蒸汽灭菌（3）上一次划线的末端（4）选择纤维素酵母菌无氧（或密闭）3.（1）不能缺少植物激素（或缺少植物需要的各种营养）（2）目的菌选择（3）尿素葡萄糖为目的菌提供氧气（4）稀释涂布平板法（5）1和23（6）1.2.3（7）高压蒸汽灭菌4（1）圆褐固氮菌（2）硝化细菌（3）青霉素（4）金黄色葡萄球菌、金黄（5）黑色、大肠杆菌（6）大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌酵母菌和大肠杆菌、乳酸菌（7）纤维杆菌（8）氮源只含尿素5.（1）纤维素（酶）（2）B、E（3)选择培养基、纤维素（4）酶的活性（5）酵母菌；方程式略6．（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰7．（1）制备MS固体培养基（配制培养基）（2分）外植体消毒（2分）（两空可互换）（2）植物激素（2分）无菌（2分）（3）诱变处理（或紫外线照射或射线照射）（2分）固体（1分）高浓度蔗糖（或高浓度葡萄糖或高浓度糖）（1分）调低（1分）（4）缺乏相应分解酶系（或缺乏能分解木质素、纤维素和半纤维素的酶）（1分）无机盐（1分）8（1）牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂；蛋白胨；牛肉膏；牛肉膏；凝固剂（2）比例；搅拌；琼脂糊底引起烧杯破裂（3）高压蒸汽灭菌锅；100；121℃；；废弃（4）外；冷却；4