高中生物实验方法与常用试1

高中生物实验方法与常用试剂发布：ykb  2012年03月01日  点击：36  预科部生物组实验是高中生物的重点也是难点，高考中对实验的考查往往是来源于课本实验而又要高于课本实验，因此对课本实验的分析和总结，往往就显得特别重要。1．实验方法　(1)化学物质的检测方法：（检测物质的有无）①淀粉——碘液②还原糖——斐林试剂、班氏试剂③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝）④乳酸——pH试纸⑤O2——余烬复燃⑥无O2——火焰熄灭⑦蛋白质——双缩脲试剂⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液（碱性染料）⑨DNA——二苯胺试剂⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液○11亚硝酸盐——对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐　(2)实验结果的显示方法：①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量 ③原子途径——放射性同位素示踪法④细胞液浓度大小——质壁分离⑤细胞是否死亡——质壁分离⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化)⑧胰岛素作用——动物活动状态⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基　(3)实验条件的控制方法：①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水③除去容器中CO2——NaOH溶液④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠⑨线粒体提取——细胞匀浆离心⑩灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。　　(4)实验中控制温度的方法： ①还原糖鉴定：水浴煮沸加热②酶促反应：水浴保温③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热④DNA的鉴定：水浴煮沸加热⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养2.生物学中常用的试剂：（1）斐林试剂：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.05g/mlCuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。 （2）班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。 （3）双缩脲试剂：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.01g/mlCuSO4（乙液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。 （4）苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。 （5）二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。 （6）甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。）（7）50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ 染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。（8）75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变性。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。（9）95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。 （10）①在解离液配制中，15%的盐酸和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。②在观察细胞中DNA和RNA在细胞中分布的实验中，用于杀死细胞，改变细胞膜的通透性，使有利于染色。 （11）龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。（也可以用醋酸洋红染色）。（12）澄清石灰石：鉴定二氧化碳的存在，反应时溶液变浑浊。（13）溴麝香草酚蓝：鉴定二氧化碳的存在，中性是为蓝色，遇二氧化碳时呈黄色。（14）重铬酸钾：鉴定酒精的存在，在酸性条件下，与酒精反应呈灰绿色。（15）碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。 （16）丙酮：用于提取叶绿体中的色素。 （17）层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油）可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。  （18）二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。 （19）碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。 （20）0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。 （21）0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血。 （22）氯化钠溶液：①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为2mol/L、0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最高。②浓度为0.9%时可作为生理盐水。（23）水：①在制作切片装片时现在载玻片上滴加一滴清水，以便制作。在质壁分离实验中就便于做初始测定。②在质壁分离实验时，用于发生质壁分离细胞的吸水，以便质壁分离复原。③DNA粗提取与鉴定实验中，第一次加水使鸡血细胞破裂释放出核物质，第二次加水调节NaCl溶液的浓度使DNA析出。（24）酚酞溶液：酸碱指示剂，用于显示NaOH渗透入琼脂块的深度。（25）刚果红：纤维素的鉴定试剂，与纤维素反应显红色用于鉴定纤维素的存在。（26）果胶酶：水解植物细胞壁的果胶层，以增加果汁的产量和澄清度。（27）NaOH:用于吸收二氧化碳，常用于空气中的二氧化碳和吸收呼吸作用过程中产生的二氧化碳。（28）NaHCO3：在光照时产生二氧化碳，常用做二氧化碳的缓冲溶液。