某生物技术有限公司项目立项建议书

山东省技术创新项目计划项目立项建议书项目名称：肿瘤生物治疗的某技术项目承担单位：某生物技术有限公司项目主管单位：济南市经济和信息化委员会[键入文字] 【目录】第一部分　立项理由第二部分实施方案第三部分　经济技术指标第四部分　项目资金第五部分　申报单位财务状况第六部分　申报单位概况与条件[键入文字] 一、立项理由（一）发展现状肿瘤生物治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种利用自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，这一系列的新型治疗方法可以通过弥补、激发和增强人体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。肿瘤生物治疗是继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术。该方法目前已广泛在美国、日本等国使用，作为肿瘤综合治疗的一个重要组成部分。2007年，韩国药监局也正式批准经试剂系统扩增活化的淋巴细胞进入肝癌治疗的IV期临床治疗、恶性脑瘤的III期临床治疗试验。（二）目标市场分析中国每年新发肿瘤病例220万、因癌症死亡人数为160-170万，现有患者病例310万(2009年数据来源：中国抗癌协会)。近20年来，中国癌症死亡率上升了29.42%，癌症死亡占城市居民总死亡24%，中国每4-5个死亡者中就有1个死于癌症。以目前癌症发病的上升趋势，预计到2020年中国每年将有550万新发癌症病例，因癌症死亡人数将达到400万，癌症患者将达到775万，对抗癌症的任务将任重而道远。近年来，国内抗肿瘤药物市场销售额与销售数量都呈明显上升趋势，尤其自2003年开始增长速度更大，2003年市场增长率为[键入文字] 28.12%，2004年增长率为34.24%。目前肿瘤的治疗手段以手术、化疗、或放射疗法为主，但患者经过上述治疗后，体内仍残留肿瘤细胞。在治疗病患的过程中，医生也常会担心患者的骨髓因为接受多次或高剂量化疗而被破坏殆尽，无法自我生成身体所需的造血干细胞，所以化疗剂量使用保守，但却可能因此导致癌症复发，造成治疗的两难。肿瘤生物治疗不仅可以有效的减轻患者放化疗后的不适感，而且可以帮助清除残留肿瘤细胞，防止肿瘤的复发和转移，解决传统肿瘤治疗的两难问题，以达到延长患者生命，提高患者生存率和生活质量的作用。一、实施方案（一）、技术特点、关键技术和关键工艺1、技术特点a.无血清培养体系和药用级别细胞因子培养高抗肿瘤活性的痘苗病毒激活细胞因子诱导的自然杀伤细胞b.细胞活性高、稳定性好其中主要效应细胞为：CD3+CD56+自然杀伤细胞（NK）[键入文字] 图示回输的肿瘤免疫细胞通过血管到达肿瘤部位，识别肿瘤细胞，通过穿孔素突破肿瘤细胞膜，进而杀死肿瘤细胞。2、关键技术持续添加新鲜培养基的不间断培养技术：使用泵装置将含有细胞因子的新鲜培养基不间断的泵入淋巴细胞培养袋直至培养结束。3、关键工艺痘苗病毒、特异抗体包备工艺：为使培养细胞在痘苗病毒或特异抗体的持续刺激下扩增分化，预先将细胞培养袋用痘苗病毒培养物或特异抗体包备。（二）、技术操作流程1.采取患者20-100ml外周血2.分离其中的淋巴细胞3.细胞因子、抗体刺激培养分离的淋巴细胞一天4.痘苗病毒、细胞因子刺激持续培养淋巴细胞14天5.[键入文字] 刺激培养淋巴细胞的计数、表型分析、微生物和内毒素检测以确定细胞培养质量6．细胞回输：第一次回输细胞一般在采血后14-16天。对进展期患者：之后4-6天回输一次；对配合化疗患者：每次化疗给药2天（及9天）进行细胞回输治疗。对术后及肿瘤较为稳定的患者：每1至2周进行一次细胞回输治疗。（三）、实施方式：自主开发（四）、项目进度与完成期限1、项目起止年限：2012年7月1日至2013年6月30日。2、项目具体进度要求2012.07.01～2012.07.31资料收集和产品设计2012.08.01～2012.12.31实验阶段2013.01.01～2013.2.28实验设计改进阶段2013.03.01～2013.04.30小批试制阶段2013.05.01～2013.06.30项目完成和项目鉴定一、技术经济指标（一）与现有产品、技术的比较此肿瘤免疫细胞相比较于传统的CIK细胞培养方法有以下优势：a.治疗的安全性：该疗法在日本已经完成了超过2000例病人的临床治疗。副作用以自限性低热（37°C~38°C）为主，所观察到的副作用均为1或2[键入文字] 级并且具有自限性，未有患者出现肺或肾部的症状、任何迹象的感染、肝功能衰退或自身免疫失调反应。b.治疗的有效性：根据《TheLancet》报道，在日本进行的肝癌手术后大规模随机临床试验中，使用此肿瘤免疫细胞进行的免疫治疗可提高患者的无复发存活率：与对照组相比，免疫治疗组出现首次复发的时间要明显延长（P=0.008）。与无该治疗的病人相比，此肿瘤免疫细胞治疗组肝癌术后复发率降低18%，复发的危险率减少了41％（P=0.01）。国内的细胞免疫治疗尚无类似报道。c.细胞扩增的高效性和高活性：此肿瘤免疫细胞方法的细胞的扩增效率约为300~1000倍，保证少量外周血即可达到所需细胞数目。其培养后活率在95％以上，12小时内细胞活率没有降低，24小时内细胞活率降低约5％，细胞质量稳定，细胞制剂可长途运输。d.细胞产品质量的可控性和细胞产品规范生产的可操作性本试验所采用的细胞培养试剂为批量生产的此肿瘤免疫细胞培养试剂系统，包括从基本培养基的配置、抗体和细胞因子的添加，均采用了严格的标准化试剂和细胞培养用一次性耗材的供应、质量控制、批次一致性等的质量保证系统。同时建立了细胞培养的标准化操作流程。在此标准化系统下进行的细胞培养，细胞的扩增效率约为300~1000倍，活率在90％以上，12小时内细胞活率没有降低，24小时内细胞活率降低约5％，细胞类型主要以CD8+T细胞为主（50％~70％），CD3+CD56+T细胞约为20％~30％,[键入文字] 系统操作过程中实行严格的系统无菌控制，细胞培养体系为密闭体系，保证细胞产品无细菌、霉菌、支原体、病毒等任何微生物和内毒素的污染，使细胞产品有质量可控性。而系统的使用中无需人工添加任何试剂，将人为干扰因素和不确定因素降至最低，使细胞产品具有规范生产的可操作性。（二）技术性能指标和参数检测项目检测方法结果判读合格标准1细菌、霉菌细胞回输前，分别取10ml待检细胞悬液加入厌氧、需氧检菌瓶中，放入梅里埃血培仪培养7天后，观察检测结果。细菌培养曲线平缓为阴性，曲线有较大起伏为阳性。厌氧、需氧培养瓶培养曲线都为平缓曲线，即阴性。2真菌细胞回输前，分别取10ml待检细胞悬液加入厌氧、需氧检菌瓶中，放入梅里埃血培仪培养7天后，观察检测结果。细菌培养曲线平缓为阴性，曲线有较大起伏为阳性。厌氧、需氧培养瓶培养曲线都为平缓曲线，即阴性。3内毒素取终细胞悬液200ul加入美国ACC公司0.25EU/ml将检测管轻轻倒转180°液体沿管壁流下，判读为阴性，即内毒素≥[键入文字] 的鲎试剂内毒素检测管中，振荡混匀，放入37℃恒温水浴箱，60min后观察结果(保证管中溶液处于水面以下)。，管底不形成凝胶，沿管壁流下为阴性；若管底形成凝胶且倒置不滑落为阳性0.25EU/ml。4细胞数量取终细胞悬液1ml于EP管中，充分混匀后置于KX-21型全自动三分类血球计数仪计数。计数仪计数三次，取平均值。细胞数目≥3.0×109个。（注①）5细胞活率取终细胞悬液10ul，在CKX-31型倒置显微镜下用台盼蓝染色计算细胞活率。被台盼蓝侵染成蓝色为死细胞。细胞活率≥90%。（（注②）（三）国产化程度所有材料、仪器大部分为进口。现正寻找国产材料、仪器进行替代。（四）经济效益本产品单位原材料成本平均约为0.7万元，单位售价约为2.8万元，利税约为5.5%。如按年产150份细胞系统计算，年销售总额410万元，利税22.55万元。（五）社会效益[键入文字] 本产品具有很高的社会效益。作为国际抗肿瘤生物治疗前沿的痘苗病毒激活细胞因子诱导的自然杀伤细胞可以有效杀伤恶性肿瘤细胞，不仅可以清除手术后或放化疗后患者体内残留的肿瘤细胞从而达到治愈肿瘤的目的，而且可以抑制转移肿瘤病灶的生长从而达到延长患者生命的目的。某生物技术有限公司开发痘苗病毒激活细胞因子诱导的自然杀伤细胞在国内尚属首家，如果开发成功，将不仅使广大肿瘤患者受益，同时将获得很高的经济效益，获得社会效益、经济效益双丰收。一、项目资金1、总需资金与年度资金预算(1)项目总需资金166万元，其中：序号经费预算金额（万元）一仪器设备购置90二能源材料费40三试验费10三人员劳务费21四会议差旅费3五其他费用2总计　166二、申报单位财务状况本企业于2011年11月底成立，注册资金300万元，2012年3月正式运行，截止目前为止，2012年3[键入文字] 月开始进入运营，现以实现销售收入210万元，利税11.55万元。一、申报单位概况与条件本公司是由济南市政府引进的5150高层次人才王倩博士创办的民营科技企业，2011年11月成立，并落户在济南高新技术开发区。主要经营业务是：生物技术的开发及技术咨询、技术服务、技术转让；企业现有18人，其中博士1人，硕士4人，本科10人，从事技术研发人员8人，占企业人员总数的44%,公司已投资115万元建立试验室，实验室设备有生物安全柜、台式离心机、二氧化碳培养箱、无菌接合机、助吸式移液器、液氮罐等，达到了国内先进水平，提高了“高抗肿瘤活性的细胞因子诱导的杀伤细胞”的活性和稳定性。公司的创业项目为用于肿瘤治疗的细胞产品的开发与应用。公司站在肿瘤生物治疗领域的前沿，在应用国内市场现有体外扩增淋巴细胞产品的基础上，将着力开发推广目前市场刚刚起步的体外扩增树突状细胞和国内市场尚无的体外扩增痘苗病毒刺激细胞因子诱导的自然杀伤细胞。公司的细胞产品在国内具有领先地位，并前已经与省内外大型医疗机构建立了合作关系，预计将很快占领市场。[键入文字]